我們知道，ELISA 測定中影響要素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢驗(yàn)中除正常反響外，有時常可見到一些錯誤結(jié)果(即假陽性或假陰性)，那么致使試驗(yàn)不成功的主要原因有哪些咧？
標(biāo)本的影響：溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清選用ELISA法檢測易發(fā)生假陽性。或許是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗刷過程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，發(fā)生假陽性。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
第二，標(biāo)本受細(xì)菌污染：因菌體中或許含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因而，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測定結(jié)果。
第三，標(biāo)本保存不妥：在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、構(gòu)成假陽性；為克服上述攪擾，ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮收集；如不能當(dāng)即測定，5d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不行激烈振動。
第四，標(biāo)本凝結(jié)不全：在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝結(jié)時即強(qiáng)行離心別離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在 ELISA 測定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊，易構(gòu)成假陽性結(jié)果；因而血液標(biāo)本收集后有必要使其充分凝結(jié)后再別離血清。
