酶聯(lián)免疫檢測方法有間接法，阻斷法，競爭法，夾心法等。夾心法中，包被的抗體與酶標(biāo)抗體，假如是單抗，理論是不能用一樣的，不外商品化的單抗有可能是混合單抗，識別不同的表位的抗體混在一起，這樣就又可以用一樣的。在今天的技術(shù)下載內(nèi)容中，是基免為您分享酶聯(lián)免疫雙抗夾心法檢測攻略：
一、標(biāo)本因素不可忽略
1.振蕩提取
將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測組分。
① 振蕩方式：振蕩器上進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。
② 在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時，應(yīng)邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團，不利于提取。
3.在用有機溶劑提取過程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，解決的方法有：①用細(xì)頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復(fù)離心。②再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。
4.濃縮
由于凈化過程中引入的溶劑，可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干，再用復(fù)溶液溶解干燥殘留物。
濃縮方式：氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜。
注意：
① 在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。
② 在吹樣本時，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。
③ 樣本吹干后應(yīng)立即取下，避免吹的時間過長，影響zui終檢測結(jié)果。
④ 不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。
5.凈化
經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程，我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的zui常見的凈化是液液分配法。
二、試劑盒的靈敏度也是關(guān)鍵之一
一般說來，如果待測樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較高，則對靈敏度要求相對小一些。如果待測樣本中目標(biāo)蛋白的濃度比較低，則必須考慮靈敏度的問題。試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準(zhǔn)確的，低于這個值因為與曲線是個“S"型結(jié)構(gòu)有關(guān)，所以結(jié)果是有偏差的，是一種估算。再加上實驗誤差，所以達(dá)不到理想的效果。建議選擇試劑盒時，應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。
相對靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%
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