1. 正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證試驗作用的性。有時本底較高，闡明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中，進行各項試驗條件的選擇是很重要的，其間包括：
① 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在運用前均可進行選擇：用等量抗原包被，在同一試驗條件下進行反應(yīng)，查詢其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附功用是否杰出。
② 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有必定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進行包被后，在其它試驗條件相一起，查詢陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來說一般為1～10μg／ml。
③ 酶符號抗體作業(yè)濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。然后再固定其它條件或采用“方陣法”(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體分別為不同的稀釋度)在正式試驗系統(tǒng)里地滴定其作業(yè)濃度。
④ 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用，應(yīng)留心防護。有條件者應(yīng)運用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)參與強酸或強堿以中止反應(yīng)。一般底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物運用液有必要新鮮制造，尤其是H2O2在臨用前參與。
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